MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

发布日期：2020-10-15 11:46　浏览次数：

英文名称：MTT-Cell Based Proliferation/Toxicity Assay Kit

产品货号：K017

简介：菲恩生物MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测，主要用于分析细胞生存能力及细胞增殖能力，也可用于药物的潜在毒性实验，因为药物可刺激或抑制细胞的生存及生长。

产品详情

名称：

MTT-Cell Based Proliferation/Toxicity Assay Kit

介绍：

MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。MTT分析为对活细胞内琥珀酸脱氢酶活性的比色测定，活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。主要用于分析细胞生存能力及细胞增殖能力，也可用于药物的潜在毒性实验，因为药物可刺激或抑制细胞的生存及生长。甲臜溶解液可溶解细胞中的甲瓒并产生有色溶液。用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。

货号：

K017

套件组分：

试剂	包装	保存
MTT 溶液	5ml	-20°C, 避光
Formazan溶解液	55ml	4°C或室温

故障排除指南：

问题	可能的原因	推荐的解决方案
吸光度读数太高或太低	1.单元数太高或太低 2.细胞被污染或细胞不健康	1滴定细胞密度以获得最佳吸光度读数 2.仅使用健康细胞
复制品一致性差	1.细胞接种不正确 2.试剂移液不正确	增加细胞接种

所需但未提供的材料：

√ 移液器和枪头
√ 用于培养细胞的96孔板
√ 能够测量570 nm处的吸光度96孔酶标仪
√ 蒸馏水

执行测定：

步骤7中获得的数据（吸光度与细胞数的关系）图应提供具有线性部分的曲线。用于检测的细胞数量应在曲线的线性最佳部分内，并且吸光度值介于0.75和1.25之间，然后可以测量刺激和抑制细胞增殖。为获得最佳结果，应使用处于对数生长期的细胞，并且最终细胞数应不超过106个细胞/cm2。每个实验应在无细胞的孔中做空白对照，其中添加所有试剂。分析将包括：
1.空白孔仅包含培养基。
2.未经处理的对照细胞。
3.用待测物质处理过的测试细胞。
如果每孔使用的培养基超过100ul ，则相应增加MTT试剂的量；例如，对于250ul 培养基，请使用25ul MTT试剂。

数据解释：

低于对照细胞的吸光度值表明细胞增殖速率降低。相反，较高的吸收率表明细胞增殖增加。很少有增殖的细胞数量可以被细胞死亡所抵消。细胞死亡的证据可以从形态变化中推断出来。

操作步骤：96孔板操作：

如果您熟悉此过程并且知道要在特定测定中使用的细胞计数，则可以遵循此基本规程。
1.96孔板中的初始细胞在100ul 培养基中的密度为2000细胞/孔（用于增殖测定）或5000细胞/孔（毒性测定）（取决于细胞类型）
2.根据实验孵育适当的时间，并用待测物质进行处理。
3.加入10ul MTT试剂
4.在培养箱中孵育细胞3-4小时。黑褐色的formazan晶体在细胞中形成。如果细胞密度更高，可以相应地缩短孵育时间。
5.加入100ul formazan溶解溶液。
6.当紫色沉淀完全溶解时，在37°C孵育4小时。
7.记录在570 nm的吸光度。
注意：
1.由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发的问题。一方面，由于96孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加PBS，水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。
2.Formazan溶解液结冻或产生沉淀时可以56℃水浴孵育促进溶解，并且必须在全部溶解并混匀后使用。
3.MTT配制成溶液后为黄色，需避光保存，长时间光照会导致失效。当颜色变为灰绿色时请勿使用。

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